Novo kit de detección de ácidos nucleicos do coronavirus (SARS-Cov-2).

New Couronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit

(Flumineralscent RT-PCR Probe Method) Product Manual

【Product name 】Novo kit de detección de ácidos nucleicos de coronavirus (SARS-Cov-2) (método de sonda fluorescente RT-PCR)

【Packaging specifications 】25 Probas/Kit

【Intended usidade】

Este kit utilízase para a detección cualitativa de ácido nucleico do novo coronavirus en hisopos nasofarínxeos, hisopos orofarínxeos (gorxa), hisopos nasais anteriores, hisopos de cornete medio, lavados nasais e aspirados nasais de persoas que son sospeitosas de COVID19 polo seu proveedor de atención sanitaria. A detección dos xenes ORF1ab e N do novo coronavirus pódese utilizar para o diagnóstico auxiliar e o seguimento epidemiolóxico da nova infección por coronavirus.

【Principles of the procedure 】

Este kit está deseñado para sondas TaqMan específicas e cebadores específicos deseñados para as secuencias do xene N ORF1ab e do novo coronavirus (SARS-Cov-2). A solución de reacción de PCR contén 3 conxuntos de cebadores específicos e sondas fluorescentes para a detección específica de dianas, e utilízase un conxunto adicional de cebadores específicos e sondas fluorescentes como control estándar interno do kit para detectar xenes domésticos endóxenos.

O principio da proba é que a sonda fluorescente específica é dixerida e degradada pola actividade exonuclease do encima Taq na reacción de PCR, de xeito que o grupo fluorescente informador e o grupo fluorescente apagado sepáranse, de modo que o sistema de monitorización da fluorescencia pode recibir un fluorescente. sinal e, a continuación, A través do efecto de enriquecemento da amplificación por PCR, o sinal de fluorescencia da sonda alcanza un valor límite establecido-valor Ct (limiar do ciclo). No caso de non haber amplicón obxectivo, o grupo informador da sonda está preto do grupo de extinción. Neste momento, prodúcese a transferencia de enerxía de resonancia de fluorescencia e a fluorescencia do grupo informador é extinguida polo grupo de extinción, polo que o sinal fluorescente non pode ser detectado polo instrumento de PCR fluorescente.

Para controlar o uso de reactivos durante a proba, o kit está equipado con controis positivos e negativos: o control positivo contén o plásmido recombinante do sitio obxectivo e o control negativo é a auga destilada, que se usa para controlar a contaminación ambiental. Recoméndase establecer un control positivo e un control negativo ao mesmo tempo durante a proba.

【Main components 】

Nota:(1) Os compoñentes dos diferentes kits de lotes non se poden mesturar nin intercambiar.

(2) Prepare o seu propio reactivo: Kit de extracción de ácidos nucleicos.

【Storage conditions e expiration date 】

For BST-SARS-25:Transporte e almacénase a -20±5 ℃ durante moito tempo.

For BST-SARS-DR-25:Transporte a temperatura ambiente. Almacenar a -20 ± 5 ℃ durante moito tempo.

Evite os ciclos de conxelación-desconxelación repetidos. O período de validez establécese provisionalmente para 12 meses.

Consulte a etiqueta para a data de fabricación e uso.

Despois da primeira apertura, o reactivo pódese almacenar a -20 ± 5 ° C durante non máis de 1 mes ou ata o final do período do reactivo, a data que se produza primeiro, para evitar ciclos de conxelación e desconxelación repetidos e o número de conxelación do reactivo. -Os ciclos de desconxelación non deben exceder de 6 veces.

【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.

【Sample requirements 】

1.Tipo de mostra aplicable: solución de ácido nucleico extraída.

2.Almacenamento e transporte das mostras: almacénase a -20±5 ℃ durante 6 meses. Conxelar e desconxelar as mostras non máis de 6 veces.

【Testing method】

1.Nucleic acid extraction

Seleccione un kit de extracción de ácido nucleico axeitado para extraer ácido nucleico viral e siga as instrucións do kit correspondente. Recoméndase utilizar un kit de purificación e extracción de ácidos nucleicos producido por Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. ou un kit de purificación de ácidos nucleicos equivalente.

2.  Reaction reaxent preparation

2.1 For BST-SARS-25:

(1) Retire a mestura SARS-Cov-2 e a mestura enzimática, derrita completamente a temperatura ambiente mediante o dispositivo Vortex e, a continuación, centrifugue brevemente.

(2) Engadíronse 16,5 µL de mestura enzimática a 358,5 µL de mestura SARS-Cov-2 e mesturáronse ben para obter a solución de reacción mixta.

(3) Prepare un tubo octal de PCR limpo de 0,2 mL e márqueo con 15 µL da solución de reacción mixta anterior por pozo.

(4) Engade 15 μL de solución de ácido nucleico purificada, o control positivo e o control negativo, e cubra con coidado a tapa do tubo octal.

(5) Mestura ben invertendo boca abaixo e centrifuga rapidamente para concentrar o líquido no fondo do tubo.

1